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Investigación y Desarrollo




Investigación y Desarrollo
Fundamento de la PCR
La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) consiste en la amplificación de fragmentos de DNA mediante el uso de la enzima DNA polimerasa. Esta enzima tiene capacidad para sintetizar nuevas cadenas de DNA mediante la incorporación de bases nucleotídicas, a partir de una secuencia corta conocida (oligo, cebador o primer) que híbrida de forma complementaria con uno de los extremos de la hebra.
El crecimiento de la nueva hebra se realiza en sentido 5’ a 3’.

Los termocicladores son capaces de realizar rápidos cambios de temperatura que permiten realizar los tres pasos de la reacción de PCR de forma cíclica: desnaturalización del DNA, alineamiento o unión del cebador con la secuencia de DNA complementaria y extensión de la cadena.

La PCR tiene multitud de aplicaciones, tanto en investigación básica como en aplicada:

La PCR de punto final permite detectar y controlar fragmentos de ADN de interés (técnica de clonaje, recombinación dirigida, etc.).

Medicina: Como herramienta de diagnosis, como por ejemplo, el genotipado de especies que provocan un determinado cuadro infeccioso y en el diagnóstico de enfermedades hereditarias presentes en el genoma.

Paleontología, antropología biológica y ciencias forenses: permite recuperar las escasas cantidades de DNA que aun no se ha degradado.

Estudios evolutivos: establecimiento de relaciones filogenéticas de diferentes especies vegetales, animales y microorganismos.

Aplicaciones de la PCR
Prueba comparativa de PCR entre el equipo comercial y Termogen I
Prueba de amplificación de una secuencia de 1500pb
Organismo Blanco:  Bacillus clausii - Marcador 1K
Primera Línea:
Vacía.

Segunda Línea:

PCR del equipo Thermo Px2
de Thermo Electron Corporation.

Tercera Línea:
PCR de Termogen I

Cuarta Línea:
Marcador de Peso Molecular
Hyperladder 1Kb

Quinta Línea:
Control: Mezcla de PCR, pero sin procesar en ningún equipo.
1     2    3   4   5
Prueba de PCR de  Termogen I
Utilizando dos iniciadores distintos en el mismo tubo (2 pares)
2 línea PCR de Termogen I - 4 línea Marcador (Algo borroso)
Efectutivamente se realizaron las dos amplificaciones con éxito!
Para el equipo Termogen I se realizaron más de 100 pruebas de PCR con Bacillus clausii y E. coli, todas coincidieron con el equipo comercial de marca reconocida (Thermo), cuando falló la PCR en Termogen I también falló en el equipo comercial de marca reconocida.
Las imágenes fueron tomadas de la cubeta de electroforesis con Luz UV incorporada de Abbi Win que estará a la venta en poco tiempo.
Equipos Termocicladores, Termociclador, PCR, Biologia Molecular, Amplificación, ADN, Electroforesis, transiluminador, para Bogota, Colombia, Panama, Mexico, Peru, Ecuador, Bolivia, Costa Rica, Nicaragua, Honduras, Salvador, Guatemala, Guyana, Chile, Paraguay, Uruguay


Imágenes de Electroforesis
posterior a la PCR con Termogen I

Prueba de amplificación del 16S
Organismo Blanco:  Bacillus clausii
Como marcador de peso se utilizó el resultado de PCR del mismo 16S en un equipo de renombre
   
   
Prueba de PCR de  Termogen I
Utilizando un iniciador diseñado por Abbi Win J1 y J2  
Primera línea PCR de Termogen I - 2 línea Marcador de Peso HyperLadde 50pb
Tamaño del producto de PCR 572pb - Organismo Blanco E. coli
Se realizó la amplificacion con éxito!